Prueba API 20E

agosto 10, 2018 Desactivado Por admin

UNIVERSIDAD DE PUERTO RICO CAROLINA DEPARTAMENTO DE CIENCIAS NATURALES BIOL 3704 PRUEBA API 20 E La batería de pruebas AP120E es un sistema de identificación rápida para bacterias de la familia Enterobacteriaceae y otras bacterias Gram (-). Básicamente consta de 21 pruebas bioquímicas estandarizadas y miniaturizadas y una base de datos. Este sistema presenta las ventajas de ser rápido, eficaz y de permitir realizar numerosas pruebas a la vez. Cada tira de API 2C]E contiene 20 microtuboso ocillos con distintos sustratos next pag deshidratados.

Cada Los microtubos se in icroorganismos, en los medios. Las tiras OF5 ula p uímica distinta. ión de ue rehidrata 70C y por efecto del metabolismo bacteriano se producen cambios de color espontáneos o bien por la adicción de reactivos. La lectura de las reacciones se hace mediante comparación con una tabla de lectura donde se indica si los microorganismos deben considerarse positivos o negativos para cada reacción según el color aparecido. l.

Batería de pruebas incluidas y tablas de lectura con coloraciones positivas y negativas Pueba Reacción / Enzimas Negativo Positivo ONPG zul oscuro o turquesa H2S producción de H2S sin precipitado negro precipitado negro URE ureasa amarillo rojo o naranja TDA triptófano desaminasa marrón-rojo IND producción de indol color rosa o anillo rosa-rojo producción de acetoína (Voges-proskauer) sin color rosa-rojo GEL gelatinasa sin difusión difusión de pigmento GLU fermentación/oxidación de glucosa azul o verde MAN fermentación/oxidación de manitol INO fermentación/oxidación de PAGL2 ops la cúpula, de todos los pocillos.

Llenar la cúpula de los tubos CIT , VP, GEL con la suspensión de bacterias. Llenar con aceite mineral las cúpulas de los pocillos ADH, LDC, ODC, URE, H2S para obtener anaerobiosis. Poner la tira en su propia cámara húmeda de incubación. Previamente poner agua (5 ml) en los espacios de la cámara para proporcionar una atmósfera húmeda durante la incubación. Incubar a 37 0C durante 18-24 h. La lectura de los resultados se lleva a cabo por comparación de los colores de cada microtubo con los de las tablas de lectura (tabla y fig. 2). Y anotando el resultado como positivo o negativo.

Fig. 2 Tabla de lectura de colores para API 20E. III. Revelado de pruebas que requieren reactivos para la lectura se tienen en cuenta los siguientes criterios: Si la glucosa da negativo y las pruebas positivas son 2 0 menos de 2, no hay que añadir reactivos. Si la glucosa es positiva y/0 3 0 más pruebas son positivas se revelan los test que requieren reactivos: Añadir una gota de FeC13 10 % (cloruro férrico). Positivo — color marrón oscuro. Añadir una gota del reactivo 1 (KOH al 40%) y una gota del reactivo 2 (C2H50H). Positivo = color rosa fuerte o rojo en 5-10 minutos.

Añadir una gota de reactivo de Kovacs. Positivo = aparece un anillo rosa-rojo PAGL3 ops Anadir una gota de nitrato A (ácido sulfanilico) y otra de nitrato B (a-naphthylamine). Positivo: cambio en color a rojo (reducción de nitrato a nitrito). De no haber cambio en color añada un poco de polvo de zinc. Positivo: no cambio en color, el nitrato se redujo a amonia o nitrógeno molecular (gas). Negativo: si hay cambio en color a rojo zinc redujo el nitrato a nitrito y no el organismo. IV. Perfil numérico e identificación Del conjunto de reacciones y resultados se obtiene un perfil umérico de 7 cifras.

Los microtubos están separados en grupos de tres: en total tenemos 7 grupos de tres tubos o tripletes (el test número 21 corresponde al test de la oxidasa). A cada pocillo se le da el valor O, 1, 2 04 (fig. 3). Si la reacción es negativa se pone O. Si la reacción es positiva se pone: 1 si es el primer pocillo de un triplete, 2 si es el segundo, 4 si es el tercero. Se suman los valores de cada triplete y se obtiene un código de 7 cifras. Con este código se busca en la tabla de identificación la especie de que se trata. Fig. 3.

Hoja para calcular el perfil numérico para la identificación con la prueba API 20E Algunos Perfiles numerico PAGL40FS 0210004 Alcaligenes sp. 0314000 Proteus mirabilis 0504512 Salmonella paratyphi A 0576001 Proteus vulgaris 0776000 1000004 Pasteurella sp. 1014743 Klebsiella ozaenae 1104112 Shigella sonnei 1214012 Yersinia pseudotuberculosis 1214773 Klebsiella pneumoniae 2206004 Pseudomonas aeruginosa 2504752 Salmonella spp. 3005573 Enterobacter cloacae 3246527 Aeromonas hydrophilia 4004550 Salmonella cholerasuis Salmonella typhi 4104100 Salmonella gallinarun 4357106 Vibrio parahemolvticus